熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) 是免疫熒光細胞化學的基本工具。它是由光源、濾板系統(tǒng)和光學系統(tǒng)等主要部件組成,利用一定波長的光源照射被檢物體,使之發(fā)出熒光, 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。熒光顯微鏡用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運輸、化學物質(zhì)的分布及定位等。 細胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一。
1、細胞/細菌/污泥類樣本
①細胞: 凍存的細胞;25平方厘米培養(yǎng)瓶長到70%加滿培養(yǎng)基室溫固定好寄送;
②細菌:菌液5000 rpm離心10 min,于1.5 mL離心管中得到綠豆大小沉淀,寄送沉淀。細菌類需要死活染色/ROS染色的,一般加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸。
③蛋白/多糖類:樣本加冰袋泡沫盒4度保存或者2.5%的戊二醛固定4度保存,樣品不和冰袋接觸。
④污泥類:樣本如果太厚,可以進行冷凍切片,具體請和工作人員溝通。
2、植物類樣本
① 直接拍攝:樣品長寬不超過20mm,高不超過10mm;或直徑不超過10mm,厚度不超過5mm,一定標出測試面。一般加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸。
②制樣后拍攝:可進行簡單冰切及刀切,軟化等。樣本準備好后加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸。
3、生物膜類樣本
①金屬/瓷磚/巖石等塊體類:建議長寬高尺寸不超過1 cm,且均要求樣品表面平整,需要標出拍攝面(測試面起伏<200um);
②薄膜類:直徑尺寸不超過2 cm,一般加冰袋泡沫盒4度保存,樣品不和冰袋接觸;
③若在爬片上培養(yǎng)生物膜,可將爬片粘于培養(yǎng)皿底部,充滿培養(yǎng)基,封口膜密封完全,再4度保存。
4、提供清楚激發(fā)/發(fā)射波長,拍攝倍數(shù)等要求信息;若需要染色,需要注明染色劑種類,標明染料名稱和拍攝條件(激發(fā)/發(fā)射波長)
備注:若做細胞攝取實驗或其他亞細胞器的定位實驗時,要求樣品自帶熒光。
5、細胞類樣品直接拍攝,需要封片后常溫避光郵寄。
6、固體類直接拍攝樣品建議長寬不超過20mm,厚度不超過10mm,重量不超過10g,一定標出測試面。
服務周期:
一般為樣品接收后的1-2周,具體實驗周期及送樣時間請與e測試工作人員溝通確認,謝謝!
交付內(nèi)容:
每樣交付5張照片。結(jié)果反饋請在測試完成一周內(nèi),不建議回收樣品,如有需要請?zhí)崆胺答伣oe測試工作人員。
1、激光共聚焦拍照和普通熒光顯微鏡拍照有什么不同?
熒光顯微鏡使用的光源比激光共聚焦通能低,以短波長的紫外光為主,激光共聚焦光源主要是激光,分辨率高,可以逐點掃描,可以做三維重構(gòu),適合多重染色的樣品觀察。
2、熒光顯微鏡的工作原理?
熒光顯微鏡主要是通過激發(fā)光照射發(fā)光物質(zhì),然后觀察發(fā)光物質(zhì)吸收激發(fā)光能量后其內(nèi)部原子從高能級躍遷到低能級時發(fā)射出的熒光。因此激發(fā)光的能量和發(fā)射光的能量是絕對重要的,直接影響觀察結(jié)果。在熒光顯微鏡中主要是通過兩組濾光片來實現(xiàn)對激發(fā)光能量和發(fā)射熒光能量的控制。常用的濾光片為:紫外激發(fā)光濾光片(300-450nm)、藍色光激發(fā)光濾光片(470-495nm)、綠光激發(fā)光濾光片(538-560nm),紅外激發(fā)光濾光片(608-648nm)。